设为首页收藏本站
开启辅助访问
切换到窄版

 找回密码
 注册

QQ登录

只需一步,快速开始

搜索
查看: 111|回复: 0

大肠杆菌表达系统

[复制链接]
发表于 2016-10-11 10:41:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
本帖最后由 jkr2013 于 2016-10-11 10:43 编辑

       大肠杆菌表达系统是目前最常用,也是最经济实惠的蛋白表达系统,与其他表达系统相比具有遗传背景清楚,目的基因表达水平高,培养周期短,抗污染能力强等特点,是分子生物研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。
      
金开瑞的大肠杆菌表达平台可提供全方位的重组蛋白生产服务,在表达包括可溶性蛋白、包涵体、融合蛋白等方面,拥有丰富的经验和专业技术,能解决蛋白表达过程中的各种瓶颈问题。到目前为止,已为全球各地客户提供超过3000种蛋白。


一、服务特色
1、His、GST、MBP等标签多种表达方式同时进行,确保获得最优质的蛋白;
2、保证蛋白为普通缓冲可溶;
3、纯化的蛋白经过ELISA,Western-blot,或者其它生物活性验证;
4、可提供详细的表达纯化条件,实验数据以及菌株。



二、
服务流程
  • 方案沟通
  • 接受订单
  • 质粒构建
  • 蛋白表达
  • 蛋白纯化
  • 成果交付



客户提供

目的蛋白信息或基因序列;
蛋白询价信息表。

最终交付

蛋白纯品,纯度90%以上;
表达产物检测报告,包括测序报告、实验条件、蛋白表达、纯化图谱等。

服务名称
服务项目
服务内容
交付结果
服务周期
服务报价
大肠杆菌重组蛋白表达服务
1.质粒构建
包括IPTG,阿拉伯糖,热休克,冷休克诱导方式,GST,Trx,SUMO,BMP,His,HA,Flag,myc等融合标签载体的构建。
表达质粒    测序报告
1周
请询价
2.表达菌株筛选
将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。SDS-PAGE电泳检测,挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
可提供表达菌株:DH5α, Top10,  BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, Golden, Rosetta(DE3), RosettaBlue(DE3),Rosetta gami B (DE3), C41等宿主。
表达菌株  SDS-PAGE图谱
3个工作日
请询价
3.目标蛋白表达及纯化、标签切除
摇瓶培养2-8L重组菌,诱导表达目标蛋白。通过亲和层析,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化目的蛋白;可根据需求切除标签,再纯化获得目标蛋白
大于1mg目的蛋白,纯度最少90%以上
2~3周
请询价
4.包涵体复性
蛋白诱导表达与包涵体纯化
数百种缓冲条件快速筛选最佳复性缓冲,采用稀释复性,透析复性,柱层析复性等多种技术获得纯度大于90%的包涵体。
大于1mg目的蛋白
2~3周
请询价


三、案例展示

1、GFP原核表达优化:
  GFP蛋白原核表达通常以包涵体形式表达,普通光源下,极难观察到绿色荧光。我公司通过对GFP序列进行突变,并对启动子进行筛选,优化培养条件,控制表达速率,用大肠杆菌表达的GFP蛋白,完全以可溶形式表达,自然光下可见强烈的绿色荧光。



2、复性条件筛选:
  采用96孔板阵列组合pH、盐浓度、氧化还原对、分子伴侣、表面活性剂等因素。将变性蛋白加入微孔板进行快速稀释复性,快速初筛几百种复性条件。



下图为GFP包涵体采用上述方法进行复性筛选




您需要登录后才可以回帖 登录 | 注册

本版积分规则

QQ|申请友链|小黑屋|手机版|Archiver|生物信息学论坛 ( 蜀ICP备09031721号  

GMT+8, 2017-1-17 10:51 , Processed in 0.098977 second(s), 20 queries .

Powered by Discuz! X3

© 2001-2013 Comsenz Inc.

快速回复 返回顶部 返回列表