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微生物实验常用染色液及染色方法

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发表于 2012-2-21 09:42:30 | 显示全部楼层 |阅读模式
 2 染色液配制及染色法
  2.1 美蓝染色法
  2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液
  美蓝           0.3g
  95%乙醇          30mL
  0.01%氢氧化钾溶液    100mL
  将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合。
  2.1.2 染色法
  将涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1~3min,水洗,待干,镜检。
  2.1.3 结果
  菌体呈蓝色。
  2.2 革兰氏染色
  2.2.1 结晶紫染色液
  结晶紫        1g
  95%乙醇        20mL
  1%草酸铵水溶液    80mL
  将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。
  2.2.2 革兰氏碘液
  碘          1g
  碘化钾        2g
  蒸馏水        300mL
  将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300mL。
  2.2.3 沙黄复染液
  沙黄          0.25g
  95%乙醇        10mL
  蒸馏水         90mL
  将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。
  2.2.4 染色法
  2.2.4.1 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
  2.2.4.2 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
  2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色,约30s;或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s。
  2.2.4.4 水洗,滴加复染液,复染1min。水洗,待干,镜检。
  2.2.5 结果
  革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。
  注:亦可用1:10稀释石炭酸复红染色液作复染液,复染时间仅需10s。
  2.3 耐酸性染色法(萎-倪二氏法)
  2.3.1 石炭酸品红染色液
  碱性品红       0.3g
  95%乙醇       10mL
  5%酚水溶液      90mL
  将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合。
  2.3.2 3%盐酸-乙醇
  浓盐酸        3mL
  95%乙醇       97mL
  2.3.3 复染液
  吕氏碱性美蓝染色液。
  2.3.4 染色法
  2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸气出现,但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时,应随时添加。染5min,倾去染液,水洗。
  2.3.4.2 滴加盐酸-乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1~3min),水洗。
  2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液,复染30s~1min,水洗,待干,镜检。
  2.3.5 结果:耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
  2.4 柯氏染色法
  2.4.1 染色液
  2.4.1.1 0.5%沙黄液。
  2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。
  2.4.2 染色法
  2.4.2.1 将涂片在火焰上固定,滴加0.5%沙黄液,并加热至出现气泡,约2~3min,水洗。
  2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液,复染40~50s。水洗,待干,镜检。
  2.4.3 结果
  布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色。
  2.5 奥尔特氏荚膜染色法
  2.5.1 染色液
  沙黄           3g
  蒸馏水          100mL
  用乳钵研磨溶解。
  2.5.2 染色法
  将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸气后,继续染3min。水洗,待干,镜检。
  2.5.3 结果
  炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色。
  2.6 瑞氏染色法
  2.6.1 染色液
  瑞氏色素     0.1g
  甲醇       60mL
  用乳钵研磨溶解。
  2.6.2 染色法
  2.6.2.1 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min。
  2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5),染色3~5min。
  2.6.2.3 用蒸馏水冲洗,待干,镜检。
  2.7 鞭毛染色
  2.7.1 染色液的配制
  2.7.1.1 甲液:称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸馏水中,待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
  2.7.1.2 乙液:称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。
  在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清,然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡,染液当天配,当天使用,2~3d基本无效。
  2.7.2 染色法
  在风干的载玻片上滴加甲液,4~6min后,用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色,停止加热,用水冲净,干后镜检,菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
  2.8 碱性复红染色法
  将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中,然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时,可用滤纸过滤,或静置后取上清液备用。
  注:本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色,藉以与蜡样芽胞杆菌相区别。
发表于 2013-2-21 11:09:42 | 显示全部楼层
好东东,谢楼主!
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